Jest weteranem wśród aktorów. Zanim w latach 90. zyskał popularność występował w teatrze, reklamach telewizyjnych i filmach. Przez długi czas pracował z Negro Ensemble Company i NY Shakespeare Festival, pojawiał się również na Broadwayu. W 1988 r. rozpoczął współpracę z reżyserem Spikem Lee. Okazała się ona bardzo korzystna. Udział w takich filmach jak "Czarny blues" i "Malaria" przyniósł Jacksonowi sławę. Kolejne filmy ugruntowywały jego popularność a w 1995 r. został nominowany do Oscara za rolę w "Pulp Fiction". Samuel Jackson jest aktorem charakterystycznym. Przez wiele lat grywał głównie postaci kryminalistów, którzy z reguły byli w końcowej scenie filmu zabijani. Lata 90. zmieniły jego wizerunek. Obecnie grywa bardzo różne typy bohaterów. W środowisku aktorskim uchodzi za pracoholika. Występuje w kilku filmach kinowych rocznie, nie licząc produkcji telewizyjnych.